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【医技】检验科医疗诊疗规范——第二篇 临床基础检验41-50

作者:王泓 日期:2014-06-19

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    【临床意义】
    用于肝脏代偿功能失调，胰腺病变，脂肪性痢疾等的诊断。
    【标本要求】
    同便常规检查。
    【方法与原理】
    直接涂片苏丹Ⅲ染色镜检法。
    【仪器和器材】
    显微镜、小竹棒、载玻片。
    【试剂】
    生理盐水、95%酒精饱和苏丹Ⅲ染色液。
    【操作步骤】
    1.涂片 在载玻片上滴1滴生理盐水，尽量选取标本的可疑病变部分，涂成直径1.5～2cm左右的圆形涂片；涂片厚度应适当控制。应比便常规涂片略厚。
    2.染色 在涂好的片子上滴加1～2滴95%酒精饱和苏丹Ⅲ染色液。
    3.镜检 将染色后的湿片立即放在显微镜下，低倍镜观察全片，观察有无被染成橘红色的脂肪滴。观察时间不能太久，时间太久标本会干燥，影响观察结果，应重新取标本和染色。为了能充分染色，可以稍微增加一些生理盐水和苏丹Ⅲ染液，以防治染液迅速挥发。
    4.结果判断 脂肪滴一般呈圆形或椭圆形，大小不一。被染为橘红色的为阳性。注意区分显微镜下被染为橘红色脂肪小滴和黄色脂肪小滴的区别，只有被染成深橘红色的脂肪球为苏丹Ⅲ染色阳性。
    【参考范围】
    阴性。
    【临床意义】
    1.消化道癌症早期，20%的患者可以出现潜血阳性，是消化道肿瘤早期检查和过筛实验的最简单方法，晚期患者粪便潜血阳性率可达90%以上。
    2.消化道出血、消化道溃疡患者可出现持续或间断性潜血阳性。肝脏疾病或肝外血管阻塞所致门静脉破裂后会引起出血。
   3.某些可以导致胃、十二指肠黏膜下出血的药物如每天口服阿司匹林大于2.5g。
    4.肠道寄生虫引起的出血，痢疾、直肠息肉、痔疮出血等。
    【标本要求】
    1.按照粪便常规要求留取标本并尽快送检。由于检测过程使用免疫单克隆抗体法，粪便潜血试验无饮食限制。
    2.粪便潜血试验方法还可用于尿液、胃液、呕吐物等体液标本的潜血试验。以上标本采集后放在干净的一次性容器中，尽快送检。
    【方法与原理】
    1.方法 免疫胶体金法。
    2.原理 单克隆抗体与人血红蛋白的特异反应及免疫层析；
    【仪器和材料】
    专用潜血反应小杯或小试管、小竹签。
    【试剂】
    金标法商品试纸条、蒸馏水。
    【操作步骤】
    用竹签挑取标本少许，放入小试管中，加入1ml蒸馏水，用小竹签将标本与蒸馏水混合，充分破坏红细胞。遇黏液便或呕吐物中有大量黏液时应该尽量搅拌标本，使标本中的红细胞充分释放出血红蛋白。将试纸条前端浸入试管内，液面不要超过MAX线，1～5分钟判读结果。使用免疫单克隆抗体法检测柏油便标本时，由于血红蛋白已经经过酸化和消化酶的作用，或反应物中抗原抗体比例悬殊，不能和试剂中的抗体发生特异性反应而出现假阴性，应该稀释标本后再行检测。
    结果判断：出现一条对照线为阴性，同时出现对照线和实验线为阳性，两条线都不出现为无效，应该重新测定。
    粪便中肉眼可见鲜血或显微镜下可见红细胞，可以不必进行潜血试验，而直接报告潜血实验阳性结果。
    【参考范围】
    阴性。
    【临床意义】
    无论用何种方法检查到寄生虫都能确诊寄生虫感染。不同寄生虫感染和感染的不同时期，临床症状不尽相同，检查到寄生虫病原体即可对症治疗。
    【标本要求】
    肠道寄生虫主要有肠道原虫如阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、结肠小袋纤毛虫、隐孢子虫和蠕虫及蠕虫卵。在检查肠道寄生原虫时，要求留取新鲜标本及时送检。天气寒冷时还要注意保温，以免漏检寄生虫的滋养体形态。检查肠道蠕虫及虫卵时，由于虫体抵抗外界环境的能力强，虫体形态变化小，所以对标本送检并无特殊要求。
    【方法与原理】
    1.生理盐水直接涂片法根据寄生虫的形态学特点初步检查，适合大部分寄生原虫及虫卵，滋养体和包囊的检查。但检出率较低。方法：在载玻片上滴一滴生理盐水，用竹签或小棍挑取粪便，涂在载玻片上，直径约1.5～2cm，然后盖上盖片，涂片厚度应比便常规检查的涂片略厚。
    2.碘盐水染色直接涂片法寄生原虫包囊在碘水中被染色，更有利于虫体及内部结构的观察。不能用于滋养体检查。方法：在载玻片上滴一滴卢戈碘液（4g碘化钾+2g碘加入到100ml蒸馏水中溶解。），其余操作步骤如直接涂片法检查时的操作。
    3.硫酸锌漂浮沉淀法（浮聚法） 根据寄生虫在33%硫酸锌水溶液中的比重不同，通过离心沉淀，分离浓缩检查肠道寄生虫，提高寄生虫的检出率，此法不能检查滋养体。
    4.铁苏木素染色法 根据寄生虫细胞不同结构对苏木素吸收不同，通过苏木素染色，用油浸物镜观察确定虫种。此法只适用于检查肠道原虫，不适用肠道蠕虫及虫卵检查。
    【仪器和材料】
    显微镜、离心机、试管、80～120目滤网等、载玻片、盖玻片、接种环、小竹签。
    【试剂】
    1.生理盐水或碘盐水直接涂片法 生理盐水、2%碘化钾溶液。
    2.硫酸锌漂浮沉淀法（浮聚法） 比重1. 180的硫酸锌水溶液。
    3.铁苏木素染色法 苏木素精、硫酸亚铁、碘化钾、邵氏固定液、酒精、二甲苯。
   【操作步骤】
    1.生理盐水直接涂片法 在载玻片上滴1～2滴生理盐水。用竹签挑取粪便标本少许，涂抹成直径1～2cm直径的粪膜，涂片的厚度以透过涂片可以模糊辨认5号字体为宜，太厚不能透光，太薄则影响检查的结果，必要时可压上盖片，然后镜检。
    2.碘盐水染色直接涂片法 方法同上，区别在于将生理盐水替换成2%碘化钾溶液。
    3.硫酸锌漂浮沉淀法（浮聚法） 将粪便用比重1. 180的硫酸锌水溶液溶解，经过80～120目的过滤网过滤于试管中，离心速度1500转／分钟，时间5～10分钟。用接种环粘取表面液体于玻片上，显微镜镜检。液体表面部分漂浮的主要是比重小于1. 180的包囊和部分蠕虫卵。弃去上面液体，取试管底部沉渣，显微镜检查比重大于1. 180的大部分蠕虫卵。
    4.铁苏木素染色法 主要适合于检查滋养体和包囊。
    （1）将粪便涂抹成薄片用60℃的肖氏（Schaudinn）固定液固定10～20分钟。
    （2）流水冲5～10分钟。
    （3）依次浸入50%酒精溶液5分钟、70%酒精溶液5分钟、70%碘酒精溶液5分钟、70%酒精溶液5分钟、50%酒精溶液5分钟。
    （4）流水冲5～10分钟。
    （5）浸入3%硫酸铁氨水溶液10～20分钟。
    （6）流水冲5～10分钟。
    （7）浸入0.5%苏木素染液10～15分钟。
    （8）流水冲5～10分钟。
    （9）浸入2%硫酸铁氨水溶液数秒至数分钟脱色，并随时取出染片观察脱色情况直到脱色适度为止。
    （10）流水冲5～10分钟。
    （11）浸入50%、70%、80%、90%、无水酒精逐级脱水，各5～10分钟。
    （12）浸入二甲苯中浸泡两次，各5～10分钟。
    （13）最后用加拿大树胶或光学树脂封片，晾干24小时以上。
    5.结果判断油浸物镜检查，根据寄生虫形态学判断。
    【参考范围】
    阴性，即未查见人体寄生虫。
    【临床意义】
    检出疟原虫即可确诊疟原虫感染，根据虫体形态特征可以确诊是疟原虫虫种。不同的疟原虫治疗方法有所区别。疟原虫感染的不同时期，治疗方法也有区别。
    【标本要求】
    静脉或末梢取血，制成血片。最好在患者高热时采血，可以提高检出率。
    【方法与原理】
    寄生在红细胞内的疟原虫经瑞氏-吉姆萨液染色，核被染成紫红色，胞浆被染成蓝色。根据寄生虫不同虫种的形态，鉴别不同种疟原虫和疟原虫的不同时期。
    【仪器和材料】
    光学显微镜、载玻片、烧杯、自动染片机、蒸馏水。
    【试剂】
    瑞氏-吉姆萨染色液A液、瑞氏-吉姆萨染色液B液、甲醇、蒸馏水。
    【操作步骤】
    1.厚血膜法取末梢血或静脉血一滴置于载玻片上，并摊开成薄厚均匀的厚血膜直径约1～2cm，充分晾干；另取一烧杯，内置蒸馏水，将厚血膜玻片竖立于烧杯中，使其充分溶去血红蛋白，血膜呈乳白色后，取出自然干燥；用甲醇一至两滴覆盖于血膜上，固定血膜，干燥，将制备好的血片放入自动染片机中染色。染色时间适当延长。显微镜油浸物镜镜检。结果判断：检查到疟原虫。
    2.薄血膜法 末梢血或静脉血一滴，推制成薄血膜，迅速晾干，将制备好的血片放入自动染片机中染色。
    3.显微镜油浸物镜镜检。结果判断：检查到疟原虫各期，根据其特点区分不同虫种。
    【参考范围】
    未查见疟原虫。
    【临床意义】
    阳性结果提示日本血吸虫既往感染或急性感染。
    【标本要求】
    空腹抽静脉血2～3ml，分离血清备检。
    【方法与原理】
    1.方法免疫沉淀法。
    2.原理血吸虫卵抗原与血吸虫病患者血清中特异性抗体结合，在血吸虫卵周围产生泡状沉淀物，称为环卵实验。
    【仪器和材料】
    显微镜、温箱、针头、载玻片、盖玻片、石蜡，酒精灯。
    【试剂及配套品】
    日本血吸虫干卵（商品）、蒸馏水。
    【操作步骤】
    用针尖挑取日本血吸虫干卵约100～150个，加入血清1～2滴混匀，压上24mm×24mm盖玻片，四周用石蜡封好，放置湿盒中，放37℃温箱，24小时、48小时、72小时后用显微镜观察结果。
    结果判断：如果虫卵周围出现泡状（直径大于10μm）、指状或带状沉淀物，并且边缘整齐，有明显折光即为阳性反应。阳性反应虫卵的百分率（环沉率）≥5%为阳性，环沉率为1%～4%，为弱阳性。
    一：沉淀物折光弱，外形不规则，与虫卵似连非连，沉淀环小于10μm，为阴性结果。
    +：虫卵周围出现的泡状沉淀物累计面积小于虫卵面积的1／2，或呈指状的卷曲沉淀物不超过虫卵的长径。
    ++：虫卵周围出现的泡状沉淀物累计面积大于虫卵面积的1／2，或呈指状的卷曲沉淀物超过虫卵的长径。
    +++：虫卵周围出现的泡状沉淀物累计面积大于虫卵本身面积，或呈指状的卷曲沉淀物超过虫卵长径的2倍。
    【参考范围】
    阴性。
    【临床意义】
    检查到微丝蚴即可确诊感染血丝虫。
    【标本要求】
    1.从静脉或末梢取血，涂成薄血膜、厚血膜或直接压片镜检。取血时间视不同虫种有所不同，班氏丝虫和马来丝虫微丝蚴有夜现周期性，可以在晚上10点到次日凌晨2点取血。有些微丝蚴没有夜现周期性，可以随时取血。
    2.静脉抗凝血1ml加蒸馏水9ml，混合后使完全溶血。
    【方法与原理】
    1.方法显微镜检查法。
    2.原理微丝蚴有“夜现周期性”，白天滞留在肺血管，晚上出现在外周血液中，虫种不同，夜晚出现的时间也不同，班氏丝虫出现在晚上10点至次日凌晨2点，马来丝虫微丝蚴出现在晚上8点至次日凌晨4点。利用此特性，夜间取外周血标本，检查微丝蚴。
    【仪器和材料】
    显微镜、载玻片、盖玻片、试管等。
    【试剂】
    瑞氏-吉姆萨染色液A液、瑞氏-吉姆萨染色液B液、甲醇、缓冲液、蒸馏水。
    【操作步骤】
    1.末梢取血2～3滴，在玻片上涂成薄血膜或（和）厚血膜，晾干。薄血膜玻片放置于染片机中染色。厚血膜玻片制备同疟原虫厚血膜制备方法。低倍镜镜检鉴定。
    2.静脉抗凝血1ml，加入9ml的蒸馏水，使其完全溶血，离心沉淀，取沉淀物涂片，同样方法染色镜检。
    【参考范围】
    未查见微丝蚴。
    【临床意义】
    金标法阳性表示幽门螺旋杆菌现症感染。
    【标本要求】
    EDTA-Kz抗凝静脉血。
    【方法与原理】
    1.方法间接固相免疫层析技术。
    2.原理测试样品从样品孔向上迁移时，固定在膜上的幽门螺旋杆菌抗原先于测试样品中的抗体形成抗原-抗体复合物。接着抗原-抗体复合物与胶体金标记的抗人IgG结合物结合而被检测出。质控线带含有蛋白A，它可以与人IgG胶体金标记抗人IgG-结合物结合，作为样品正确加入的质控指标。
    【试剂和配套品】
    幽门螺旋杆菌IgG抗体检查试纸（胶体金法）。
    幽门螺旋杆菌抗体检查金标法试纸、加样器。
    【操作步骤】
    1.取血25μl，加入方形加样孔，再加入一滴缓冲液。
    2.当样品前沿刚刚越过粉红色的质控线（A）时，加入三滴缓冲液（不能让样品过线太多，必须在样品前沿流出观察孔之前加入缓冲液）。
    3.拉下标有Hp字样的分离片直至到感觉有阻力。
    4. 15分钟后读结果。A、B、C三道线均出现，判断为阳性；A线出现或A、C线出现判断为阴性；B、C线出现，C线出现，B线出现，A、C线出现均无效。
    【参考范围】
    阴性。
    【临床意义】
    母婴血型不合是母亲体内免疫系统被激活，产生对胎儿红细胞抗原的特异性抗体，主要是IgG型抗体，是造成新生儿溶血病的主要原因之一。在产前检查中可通过检测O型母亲体内IgG型抗A和（或）抗B效价来预测产后发生新生儿溶血病的可能。筛查IgG型抗A或抗B效价，微柱法的灵敏度要明显高于手工法，微柱法效价＞1：256时血型不合的胎儿有可能发生溶血，报告下限为＜1：32，报告上限为＞1：1024。
    【标本要求】
    1.夫妇双方 女方红头管静脉血标本2～3ml，男方血常规管静脉血标本1～2ml。
    2.标本4℃可保存一周。
    【方法与原理】
    1.方法 抗原抗体凝集反应。
    2.原理 母体与胎儿ABO血型不合，胎儿由父方遗传来的显性抗原恰为母亲所缺少，胎儿血因某种原因进入母体，母体产生相应的IgM抗体，当胎儿血再次进入母体，母体发生次发免疫反应，产生大量IgG抗体，通过胎盘进入胎儿，使胎儿、新生儿发生溶血。IgG型的血型抗体分子量较小，为不完全抗体。这种抗体与相应抗原的红细胞盐水悬液混合后，抗原抗体虽然发生结合，但肉眼不可见，而抗人球蛋白实验能检出这种不完全抗体。BioVue系统利用免疫学抗原和抗体的反应原理，采用微柱凝集技术进行抗体筛查检测。微柱由玻璃珠和柱中的试剂组成，玻璃珠的间隙起到了分子筛的作用。实验中，向抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡内加入血清和红细胞，通过离心，玻璃珠会阻挡住已经发生凝集反应的红细胞，而没有凝集的红细胞则可通过玻璃珠的缝隙到达微柱的底部。
    【仪器和材料】
    ortho BioVue System离心机和Ortho BioVue System孵育器。
    【试剂】
    1.抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
    2.0.9%生理盐水。
    3.等渗生理盐水（BLISS液）。
    4.A1、B标准红细胞（上海血液生物医药有限公司）3%红细胞悬液。
    5.0. 2mol／L二巯基乙醇液。
    【操作步骤】
    1.试剂配制
    （1） pH7.4 PBS配制：KH2PO41.73g，Na2HPO4 （12H2O） 19.35g，NaCl 8g，加蒸馏水100ml，1.5ml分装，-20℃长期保存。
    （2）0. 2MEPBS2-巯基乙醇配制：取2-巯基乙醇原溶液150μl，加pH7.4 PBS1ml，加去离子水9ml。1ml分装，避光2～8℃保存，有效期3～6个月。
    2.首先核对夫妇二人血型。
    3.女方血3000转／分钟离心3分钟，取血清备用。男方血细胞2～3滴0. 9%生理盐水2000转／分钟离心2分钟，洗涤3次，配成3%盐水悬液备用（40μl压积红细胞+1ml 0.9%生理盐水）。若男方为AB型，则不洗男方血细胞，分别用商品化3%标准A1、B血细胞悬液。
    4.配制中和血清 取被检女方血清100μl与100μl 0.2MEPBS巯基乙醇缓冲液在小试管内混合，用封口膜密封至37℃水浴30分钟，或至室温2小时，以中和血清中的IgM抗体。
    5.取6个洁净试管，分别标5、6、7、8、9、10，各管按下表的量加入0.9%生理盐水。

管号（稀释度）
5（1：32）
6（1：64）
7（1：128）
8（1：256）
9（1：512）
10（1：1024）
生理盐水（μl）
300
200
200
200
200
200

    取20μl女方的巯基乙醇中和血清加入5号管，混匀，再取5号管中液体200μl加入6号管，混匀，依次倍比稀释，直至10号管。相应稀释度如上表所示。
    6.取出试剂卡，使用前确保试剂卡完全平衡到室温。撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行后续操作。
    7.在试剂卡上标记好标本号，各孔按顺序标记数字5～10号。向每个反应柱内加入50μl BLISS液。加样时枪头应与微柱管壁保持大约45°角，并避免直接接触。此目的是为了加样后，使微柱中的样本和试剂之间形成一定的空气间距。
    8.再分别向反应柱内加入10μl 3%红细胞悬液（何种红细胞悬液根据父方血型决定）。
    9.最后向反应柱内加入40μl不同效价的患者稀释血清（孔号与管号对应）。观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱，使反应物混匀。
    10.把卡放入37℃的BioVue孵育器孵育15分钟。
    11.用BioVue离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
    12.从微柱正反两面判读并记录结果。如男方为AB型，则需操作两张卡，重复6～7步骤。
    【判定标准】
    见图2-23。
   
    图2-23 血清IgG型抗A/B抗体效价检测（微柱法）
    结果判定

4+反应
3+反应
2+反应
1+反应
0.5+反应
 
0阴性
红细胞在柱的上面凝集，并形成二个环形带
发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃柱的上半部分
发生凝集的红细胞分布于整个柱体，柱的底部有少量的红细胞
大部分凝集的红细胞停留在柱的下半部分，柱的底部有一些红细胞
大部分凝集的红细胞穿过玻璃珠的缝隙，在柱的底部形成一个中断的（不平整的）红细胞聚集带。聚集带的上方有少量凝集的红细胞
所有红细胞均穿过玻璃珠的缝隙，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带

    以2+反应孔相对应的稀释度作为最终的报告滴度
    【参考范围】
    效价＜1：256。
    【参考文献】
    1.金汉珍，樊绍曾.新生儿母婴血型不合溶血病.上海：上海科学技术出版社，1981: 49-54， 115-125
    2.叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006:266-268
    3.Hadley AG. Laboratory assays for predicting the severity of hemolytic disease of the fetus and new born. Transpl Immun01，2002，10（223）:191-198
    4.Hadley AG.A comparison of in vitro tests for predicting the severity of haemolytic disease of the fetus and newborn. Vox Sang，1998，74:375-383
    5.张庆侠，郝建华，倪琳婷，等.三种方法检测孕妇血清IgG抗A（B）效价的结果比较，实用医技杂志，2008，2（15） :555-557
    【临床意义】
    间接抗人球蛋白实验阳性表明患者体内存在IgG型抗D抗体，此抗体可通过胎盘进入胎儿，若胎儿为RhD阳性，则胎儿、新生儿发生溶血。报告上限为＞1024。
    【标本要求】
    1.红头管静脉血标本1～2ml。
    2.产后标本应在72小时内检测；孕期标本1周内检测。
    【方法与原理】
    1.方法抗原抗体凝集反应。
    2.原理利用已知Rh系统D抗原及BioVue系统，检测RhD阴性患者血清中是否存在相应的不完全抗体的方法。BioVue系统利用免疫学抗原和抗体的反应原理，采用微柱凝集技术进行抗体筛查检测。微柱由玻璃珠和柱中的试剂组成，玻璃珠的间隙起到了分子筛的作用。实验中，向抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡内加入血清和标准人O型红细胞，通过离心，玻璃珠会阻挡住已经发生凝集反应的红细胞，而没有凝集的红细胞则可通过玻璃珠的缝隙到达微柱的底部。
    【仪器】
    BioVue离心机和BioVue孵育器。
    【试剂】
    1.抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
    2.0.9%生理盐水。
    3.等渗生理盐水（BLISS液）。
    4. 3%标准人O型红细胞悬液（上海血液生物医药有限公司）。
    【操作步骤】
    1.核对患者血型，然后标本3000转／分钟，离心5分钟。
    2.取出试剂卡，使用前确保试剂卡完全平衡到室温。撕开试剂卡上的锡纸，根据试验需要撕开所需孔。撕开后的微柱请于1小时内进行后续操作。
    3.在试剂卡相应孔上标记好标本号，向反应柱内加入50μl BLISS液。加样时枪头应与微柱管壁保持大约45°角，并避免直接接触。此目的是为了加样后，使微柱中的样本和试剂之间形成一定的空气间距。
    4.再分别向反应柱内加入10μl 3%标准人O型红细胞悬液。
    5.最后向反应柱内加入40μl患者血清（孔号与管号对应）。观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱，使反应物混匀。
    6.把卡放入37℃的BioVue孵育器孵育150分钟。
    7.用BioVue离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
    8.从微柱正反两面判读并记录结果。
    9.若标本为阳性，需将患者血清倍比稀释，做出最终滴度。方法：取12个洁净试管，分别标“阳性”，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11。1～11号管分别加入200μl 0.9%生理盐水，取患者血清200μl加入1号管，混匀，再取1号管中液体200μl加入2号管，混匀，依次倍比稀释，直至11号管，11号管混匀后弃掉200μl。相应稀释度如下：

管号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
滴度
1:2
1：4
1：8
1：16
1：32
1：64
1：128
1：256
1：512
1：1024
1：2048

    12个管均加入3%标准O型红细胞2滴，“阳性”管再加入抗D（IgG）试剂1滴，各管混匀后放入37℃水浴箱中温育1小时。水浴后，每管用生理盐水洗涤三次后，每管加入抗人球蛋白试剂1滴混合，以1000转离心1分钟，肉眼观察结果。记录标本管发生凝集的最后一管，以判断效价。“阳性”管应凝集。
    【判定标准】
    见图2-24。
   
    图2-24 间接抗人球蛋白试验（微柱法）
    结果判定

阳性结果（+）
红细胞凝集为阳性结果，表明患者血清中存在IgG型抗D抗体。无论是否发生凝集，溶血的存在视为阳性结果
阴性结果（-）
无溶血及红细胞未凝集是阴性结果，表明患者血清中不存在IgG型抗D抗体

    溶血会导致玻璃珠上方呈浅粉色至红色。部分溶血时，有可能出现凝集。
    【参考范围】
    阴性。
    【参考文献】
    1.金汉珍，樊绍曾.新生儿母婴血型不合溶血病.上海：上海科学技术出版社，1981:49-54，115-125
    2.叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006:266-268
    3. Hadley AG. Laboratory assays for predicting the severity of hemolytic disease of the fetus and new born. Transpl Immun01，2002，10（223）:191-198
    4.Hadley AG.A comparison of in vitro tests for predicting the severity of haemolytic disease of the fetus and newborn. Vox Sang，1998，74:375-383
    5.张庆侠，郝建华，倪琳婷，等.三种方法检测孕妇血清IgG抗A（B）效价的结果比较，实用医技杂志，2008，2（15）：555-557
    【标本要求】
    1.血常规管静脉血或脐血标本1～2ml，如有凝块不影响检测。
    2.标本不可保存，必须新鲜血，立刻检测。
    【方法与原理】
    1.方法 抗原抗体凝集反应。
    2.原理 利用被IgG型抗体致敏的红细胞能和抗人球蛋白抗体结合并发生凝集反应的原理。BioVue系统利用免疫学抗原和抗体的反应原理，采用微柱凝集技术进行抗体筛查检测。微柱由玻璃珠和柱中的试剂组成，玻璃珠的间隙起到了分子筛的作用。实验中，向抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡内加入患儿红细胞，通过离心，玻璃珠会阻挡住已经发生凝集反应的红细胞，而没有凝集的红细胞则可通过玻璃珠的缝隙到达微柱的底部，用以检查患儿红细胞是否已被IgG型抗体所致敏。
    【仪器】
    BioVue离心机和BioVue孵育器。
    【试剂】
    1.抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
   2.0.9%生理盐水。
    3.等渗生理盐水（BLISS液）。
    【临床意义】
    直接抗人球蛋白实验阳性表明患儿红细胞已被IgG型抗体所致敏。
    【操作步骤】
    1.洁净试管内取患儿全血1滴，注满0.9%生理盐水，2000转／分钟离心2分钟，洗涤3次，最后用0. 9%生理盐水配成3%红细胞悬液备用（20μl压积红细胞+500μl 0.9%生理盐水）。
    2.取出试剂卡，使用前确保试剂卡完全复温到室温。撕开试剂卡上的锡纸，根据试验需要撕开所需孔。撕开后的微柱请于1小时内进行后续操作。
    3.在试剂卡相应孔上标记好标本号，向反应柱内加入50μl BLISS液。加样时枪头应与微柱管壁保持大约45°角，并避免直接接触。此目的是为了加样后，使微柱中的样本和试剂间形成一定的空气间距。
    4.向反应柱内加入10μl患儿红细胞悬液。
    5.无需孵育，用BioVue离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
    6.从微柱正反两面判读并记录结果。
    【判定标准】
    见图2-25。
   
    图2-25 直接抗人球蛋白试验（微柱法）

阳性结果（+）
红细胞凝集为阳性结果，表明患儿红细胞已被IgG型抗体所致敏。无论是否发生凝集，溶血的存在视为阳性结果
阴性结果（-）
无溶血及红细胞未凝集是阴性结果，表明患儿红细胞未被IgG型抗体所致敏

    溶血会导致玻璃珠上方呈浅粉色至红色。部分溶血时，有可能出现凝集。
    【参考范围】
    阴性。
    【参考文献】
    1.金汉珍，樊绍曾.新生儿母婴血型不合溶血病.上海：上海科学技术出版社，1981: 49-54，115-125
    2.叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006:266-268
    3.Hadley A G.Laboratory assays for predicting the severity of hemolytic disease of the fetus and new born. Transpl Immunol，2002，10（223）:191-198
    4.Hadley AG.A comparison of in vitro tests for predicting the severity of haemolytic disease of the fetus and newborn. Vox Sang，1998，74:375-383
    5.张庆侠，郝建华，倪琳婷，等.三种方法检测孕妇血清IgG抗A（B）效价的结果比较.实用医技杂志，2008，2（15）：555-557


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